Въпреки това, когато емисионните спектри се припокриват, може да се открие флуоресценция от повече от един флуорохром. За коригиране на това спектрално припокриване се използва процес на компенсация на флуоресценцията. Това гарантира, че флуоресценцията, открита в конкретен детектор, произлиза от флуорохрома, който се измерва.
Защо се нуждаем от компенсация в поточната цитометрия?
Изисква се компенсация за експеримент с поточна цитометрия поради физиката на флуоресценцията. Флуорохромът се възбужда и излъчва фотон в диапазон от дължини на вълната. Някои от тези фотони се разливат във втори детектор, което кара единичните оцветени проби да изглеждат двойно положителни.
Каква е основната цел на използването на компенсираща клетка?
Основната цел е да позволи измерването на истинската флуоресценция в първичния канал, замърсен от преливането от съседни флуорофори. Следователно, компенсацията коригира флуоресцентния „нарушител“между флуорофорите. Въпреки това, той не е идеален и не може да коригира всички нежелани ефекти.
Какво е компенсационна матрица?
Компенсационната матрица е изчислена с помощта на едноцветни флуоресцентни контролни файлове, които се събират в ImageStream или FlowSight с всички събрани канали и при липса на светло поле или SSC.
Какво е спектрална компенсация?
Използване на спектралнокомпенсация означава, че сигнал от неосновни детектори все още се използва за подобряване на истинския сигнал на маркерите, където е възможно. Първичните контролни проби се използват за именуване на параметри. … Пробите, използвани за първични детектори, също помагат да се наименуват тези параметри след спектрална компенсация.
