Трипсинизацията е процес на клетъчна дисоциация с помощта на трипсин, протеолитичен ензим, който разгражда протеините, за да отдели прилепналите клетки от съда, в който се култивират. Когато се добави към клетъчна култура, трипсинът разгражда протеините, които позволяват на клетките да се придържат към съда.
Защо трипсинизираме клетките?
Трипсинизацията често се прави, за да позволява преминаването на клетките към нов контейнер, наблюдение за експериментиране или намаляване на степента на сливане в колбата чрез отстраняване на процент от клетките.
Как действа трипсинът за отделяне на клетки?
Трипсин/EDTA е комбиниран метод за отделяне на клетки. Трипсин разрязва адхезионните протеини при взаимодействията клетка-клетка и клетка-матрица чрез изрязване на аминокиселината на адхезионните протеини по-специално при лизин или агинин на С-терминала, ако аминокиселината нагоре по веригата не е пролин.
Как получавате трипсинизирани прилепнали клетки?
Процедура
- Отстранете средата от съда за култура чрез аспирация и измийте монослоя със солен разтвор без Ca2+ и Mg 2+, за да премахнете всички следи от серум. …
- Разпределете достатъчно трипсин или трипсин/EDTA разтвор в съд(и) за култура, за да покриете напълно монослоя на клетките и поставете в инкубатор при 37 °C за ~2 минути.
Как да деактивирам трипсин в клетъчната култура?
След като клетките се появят отделени, добавете 2 томаот предварително затоплена пълна растежна среда за инактивиране натрипсин. Внимателно разпръснете средата чрез пипетиране върху повърхността на клетъчния слой няколко пъти, за да осигурите възстановяване на >95% от клетките. За култури без серум, инхибитор на соевия трипсин (продукт №
