След като клетките изглеждат отделени, добавете 2 обема предварително затоплена пълна растежна среда, за да дезактивирате трипсин. Внимателно разпръснете средата чрез пипетиране върху повърхността на клетъчния слой няколко пъти, за да осигурите възстановяване на >95% от клетките.
Как да спра активността на трипсина?
Разграждането на трипсина може да бъде спряно чрез замразяване или чрез понижаване на pH на реакцията под pH 4 чрез добавяне на мравчена, оцетна или трифлуорооцетна киселина (трипсинът ще възвърне активността си, когато pH се повишава над pH 4). Усвоените проби могат да се съхраняват при -20°C.
Какво неутрализира трипсина?
Буфер съдържащ калциеви и магнезиеви йони също ще забави активността на трипсина. FBS обаче е по-ефективният начин за инхибиране на активността на трипсина.
Серумът инактивира ли трипсина?
Серумът инактивира остатъчния трипсин, останал от ензимното храносмилане на бъбреците и протеолитичните ензими, синтезирани впоследствие от клетките. Прясно трипсинизирани клетки могат да бъдат отгледани до монослоеве в отсъствието на серум, при условие че са многократно измити за отстраняване на остатъчния трипсин.
Колко медия е необходимо, за да деактивирате трипсин?
Докато използвате поне 1:1 съотношение 5-10% серум-съдържаща среда с вашия трипсин, трябва да има повече от достатъчно инхибиране, последвано от центрофугиране и среден обмен с прясна среда.
